MasterMix do amplifikacji techniką LAMP umożliwia fluorescencyjną detekcję produktu na platformie Genie? II lub w aparacie do Real-time PCR. Podobnie jak w reakcji qPCR krzywa amplifikacji informuje o przyroście ilości produktu w czasie rzeczywistym, a krzywa topnienia produktu o specyficzności reakcji i powstaniu specyficznego produktu reakcji. Taki system nie wymaga wizualizacji w żelu agarozowym czy w analizie turbidymetrycznej oraz zmniejsza ryzyko kontaminacji dzięki prowadzeniu i wizualizacji reakcji w systemie zamkniętym (close-tube system).
Izotermalne mieszaniny produkowane przez firmę OptiGene są w pełni licencjonowane do analiz LAMP przez właściciela technologii LAMP - Eiken Chemical Company.
Isothermal Master Mix firmy Optigene zawiera
- nowoczesną polimerazę GspSSD
- termostabilną nieorganiczną pirofosfatazę
- zoptymalizowany bufor reakcyjny
- mieszaninę dNTPs
- MgCl2
- barwnik fluorescencyjny (pochodną 6-FAM)
Nowoczesna szybka polimeraza DNA jest izolowana z bakterii Geobacillus sp. SSD (GspSSD). Kluczową cechą enzymu jest aktywność zastępowania nici DNA (strand displacement activity), czyli wchodzenia pomiędzy łańcuchy cząsteczki dsDNA i inicjowania syntezy nowej nici DNA. Dzięki tej aktywności możliwa jest synteza DNA w stałej temperaturze, na poziomie 60?70 °C, bez konieczności denaturacji mieszaniny. Polimeraza GspSSD posiada również niewielką aktywność odwrotnej transkryptazy, co umożliwia przepisanie RNA na cDNA oraz amplifikację w jednej probówce w czasie ok 30 min. Ponadto enzym produkuje niewielkie ilości PPi do buforu reakcyjnego.
Barwnik fluorescencyjny zawarty w Isothermal Master Mix wiąże się ilościowo z powstającym w reakcji dwuniciowym DNA (dsDNA), a jego fluorescencja jest odczytywana przez kanał FAM.