Lamp (Loop Mediated Isothermal AMPlification)
Technika molekularna umożliwiająca szybką amplifikację fragmentów DNA i RNA w warunkach izotermicznych (w stałej temperaturze), która:
-
umożliwia wysoko wydajną i wysoce specyficzną amplifikację dzięki zastosowaniu dwóch lub trzech par starterów komplementarnych do odpowiednich 6 lub 8 niezależnych miejsc na matrycy DNA
-
pozwala na szybką identyfikację patogenów ludzkich, zwierzęcych i roślinnych ? czas detekcji wynosi od 5 minut do 1 godziny (10^9 kopii DNA w czasie krótszym niż 30 minut)
-
Charakteryzuje się wysoka odpornością na zanieczyszczenia reakcji.
-
polimerazy wykorzystywane w reakcji lamp wykazują aktywność zamiany nici (ang. strand displacement activity), co eliminuje konieczność denaturacji matrycy; enzymy w zależności od pochodzenia wykazują aktywność odwrotnej transkryptazy, co umożliwia wykonanie reakcji odwrotnej transkrypcji i amplifikacji w jednej probówce;
-
produkty LAMP są różnej wielkości konkatamerami, złożonymi z wielokrotnych powtórzeń sekwencji matrycowej i tworzą struktury typu łodyga-pętla (ang. stem-loop);
-
pozwala na monitorowanie ilości produktu reakcji w czasie rzeczywistym, co eliminuje etap szacowania ilości produktu po zakończeniu reakcji;
-
? ?amplifikacja i detekcja odbywa się w jednej probówce (ang. close-tube system), co minimalizuje ryzyko kontaminacji wynik reakcji może być obserwowany ?gołym okiem?, zarówno z jak i bez dodatku barwnika fluorescencyjnego.
|